一种基于RPA的番茄褪绿病毒检测方法

番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus(ToCV)引起番茄褪绿病毒病,给番茄生产造成严重危害。开发快速准确的检测方法对该病害的防控具有重要意义。利用番茄褪绿病毒外壳蛋白(CP)基因序列,设计特异性引物,建立了ToCV的重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)检测方法,同时分析了该方法的灵敏度和特异性。结果表明,建立的ToCV-RPA方法在38℃恒温下40 min可从ToCV阳性的番茄样品中扩增出246 bp的特异性条带。扩增时间短,对设备要求低,且与番茄其他病毒无交叉反应,特异性好,灵敏度可达到PCR方法的10倍,适用于ToCV的快速检测。     

木尔坦棉花曲叶病毒编码蛋白的亚细胞定位分析

 木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMV)是典型的单组分双生病毒,并伴随β卫星分子,是棉花曲叶病的主要病原之一。本研究利用农杆菌介导的瞬时表达系统,将CLCuMV及其卫星分子编码的7个病毒蛋白在本氏烟表皮细胞中表达。通过激光共聚焦显微镜观察发现:V1、C2和C3定位于细胞核;C1和βC1定位在细胞核以及细胞质或细胞膜上,并且在细胞质中形成丝状结构;V2和C4主要定位在细胞质或细胞膜上,细胞核也有微量表达,V2可形成大小不一的颗粒状聚集体结构,C4在细胞膜上可见点状聚集体结构。同时,利用RT-PCR和Western blot对病毒各基因的转录和表达水平进行了分析。CLCuMV编码蛋白的亚细胞定位为蛋白功能的进一步研究提供重要理论依据。     

2018年中国部分地区猪瘟病毒2.1d亚型新流行株的基因组特征分析

为了解中国猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）的分子流行病学及遗传变异情况，本研究应用RT-PCR方法对2018年采集自河南、河北、山东、黑龙江和辽宁5个省份的350份疑似CSFV感染的病料进行E2和NS5B基因扩增，并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示，350份样品中21份为CSFV阳性，共获得14株CSFV的E2基因序列和7株CSFV的部分NS5B基因序列。E2全基因、NS5B部分基因序列分析表明，21份阳性样品均属于近年来在中国流行的CSFV 2.1d亚型，且新发现的2.1d亚型CSFV与中国较早2.1d亚型CSFV毒株间同源性差异不大，新发现的2.1d亚型CSFV分离株在E2基因的6个氨基酸（R³¹、S³⁴、W¹⁸²、K²⁰⁵、K³⁰³、A³³¹）上具有相同的分子特征，E2蛋白中15个位点上的半胱氨酸均未发生变异。韩国2.1d亚型CSFV在E2蛋白上具有3个独特的氨基酸（N⁹⁷、K¹⁵⁹、R²⁰⁵）特征，并且发现了韩国毒株YC11WB可能作为2.1b和2.1d亚型CSFV过渡毒株的证据，流行于中国和韩国的2.1d亚型CSFV可能分别来自于本国早期2.1b亚型CSFV的衍化。本研究证实，2018年中国及周边国家CSFV较为活跃，且流行毒株依然以2.1d亚型为主，为中国科学防控CSFV提供了依据。     

中国工业大麻种业创新发展策略研究

工业大麻是重要的经济作物，中国是工业大麻生产和出口大国。然而，工业大麻种业发展滞后对我国工业大麻高质量发展提出严峻挑战的问题。本研究采用实地调研和文献综述的方法，分析了当前国内工业大麻种业的发展态势和存在的问题，探讨我国工业大麻种业创新发展路径。研究表明，我国工业大麻种业构建了全国行业标准和地方法律规范相结合的政策保障体系，推动了育种创新主体由公益性科研院所向企业转变，创建了以多用途为特色的育种技术体系，形成了良种区域化的种植格局和技术服务体系，奠定了该产业创新发展的基础。但缺乏国家层面或跨区域协同的工业大麻法规体系、育种繁种技术资源分散和低效率共存、面临国外种业知识产权布局先发优势挑战、商业化育种体系不完善等问题成为主要障碍。因此，提出了加快完善政策保障体系、培育多元育种体系、打造生产经营体系、构建国际合作体系，以期提升工业大麻种业创新发展能力。     

Milk vetch dwarf virus infection in the Solanaceae and Caricaceae families in Southeast Asia

Milk vetch dwarf virus (MDV) is an important member of the genus Nanovirus and is transmitted by the aphid Aphis craccivora. MDV has multiple single-stranded DNA genome components, each approximately 1 kb, and two or three alpha-satellite molecules. It mainly infects plants of the legume family Fabaceae. Recently, papaya (Carica papaya) collected in Yesan, South Korea, displaying symptoms of leaf yellowing and dwarfism, was identified as a new host for MDV. To examine the geographical distribution of MDV, papaya samples with symptoms were harvested in South Korea, Vietnam, and Taiwan in August 2018, along with tomato and pepper samples grown in adjacent fields in Vietnam. The results revealed the presence of MDV not only in papaya but also in pepper and tomato. This MDV infection in members of the Solanaceae family was confirmed by Southern blot hybridization performed using a PCR product of segment S as a probe. Based on sequence analysis of three MDV components (M, S, and C3), we verified the presence of three different isolates of MDV in these three countries and homology between sequences of isolates from papaya and from members of the Solanaceae from Vietnam. Taken together, our results clearly demonstrate MDV infection in Vietnam and Taiwan for the first time and confirm that MDV can infect economically important pepper and tomato.     

氯虫苯甲酰胺拌种对稻纵卷叶螟的防治效果及安全性评价

为减少水稻抽穗前田间稻纵卷叶螟的化学防治次数及用药量，降低对天敌的伤害及农药残留，最终实现稻纵卷叶螟的简约化防控，采用氯虫苯甲酰胺对水稻种子进行拌种处理，室内测定了药剂拌种对种子发芽的安全性，并结合不同栽培模式下的田间试验，评价了不同用量下氯虫苯甲酰胺拌种对稻纵卷叶螟的控制时长及保叶效果，明确了药剂拌种对天敌蜘蛛的影响及最终残留情况。结果表明:当氯虫苯甲酰胺按有效成分用量30~120 g/hm2拌种时，对种子的发芽率及出苗均无影响。直播稻模式下，氯虫苯甲酰胺按有效成分60 g/hm2拌种，播种后110 d，其保叶效果仍高达97.13%；旱育手栽秧模式下，氯虫苯甲酰胺按有效成分90 g/hm2拌种，播种后108 d保叶效果为82%以上，旱育机插秧模式下按有效成分90~120 g/hm2拌种，播种后90 d保叶效果仍在95%以上；3种模式下拌种处理的保叶效果及持效期均远优于常规喷雾防治。研究表明，利用氯虫苯甲酰胺对水稻种子进行拌种处理，可有效控制水稻前期及中期稻纵卷叶螟的为害，降低后期田间虫口基数，并且对田间天敌蜘蛛安全性高，同时在收获的稻谷中未检出氯虫苯甲酰胺残留(残留量低于定量限0.000 8 mg/kg)。在江苏省丘陵地区粳稻区应用氯虫苯甲酰胺拌种处理，可确保水稻直至抽穗初期无需再进行稻纵卷叶螟的防治，并可显著减少后期稻纵卷叶螟虫源基数，实现稻纵卷叶螟的简约化防治。     

融合光电色选的皮带筛式油茶果壳籽分选机设计与试验

针对油茶果批量脱壳后壳籽混杂、人力分选效率低的问题，研究设计了一种融合光电色选的皮带筛式油茶果壳籽分选机。根据油茶果壳、籽与倾斜传送带间摩擦角、碰撞系数的差异，设计振动皮带筛进行初分选；利用两者灰度差异，对壳中残留籽进行二次光电分选。对皮带筛上油茶果壳、籽进行运动学与动力学分析，发现皮带倾角、皮带速度和振动频率是影响振动初分选率的主要因素；以籽箱清洁率、壳中含籽率为试验指标，开展正交旋转组合试验。当皮带倾角为19°、皮带速度为1.50m/s、振动频率为55.40Hz时，其籽箱清洁率为95.52%、壳中含籽率为24.30%，对最优参数进行试验验证，优化结果可靠。对不同茶籽比率的物料进行光电分选试验，结果表明籽箱清洁率稳定在98.23%左右，壳中含籽率保持在2.34%左右，说明光电分选可准确识别并分选出混杂物料中的油茶籽。对整机进行最优参数试验验证，该机两籽箱茶籽平均清洁率可达97.55%，壳箱中含籽率为3.27%。试验结果表明，此油茶果壳籽分选机可实现油茶果壳、籽的高效分离。     

寨卡病毒SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

为建立一种针对寨卡病毒的快速诊断方法,本研究根据寨卡病毒的3’端保守基因序列,设计合成1对引物,建立了检测寨卡病毒的荧光定量PCR方法。结果显示:所建立的检测方法的Ct值与标准品在1.41×10^1~1.41×10^10^ copies/μL具有良好的线性关系,相关性为1,斜率为-3.502;灵敏性结果显示,该方法的检测限度为1.41×10^1 copies/μL,是普通PCR的10000倍;特异性结果显示,对CHIKV、DENV和JEV无特异性扩增,特异性强;重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于1%,重复性好。本研究建立的SYBR Green I real-time PCR检测方法,可用于寨卡病毒感染的快速诊断。     

Hormetic UV-C seed treatments for the control of tomato diseases

Hormesis is a dose response phenomenon in which low, non-damaging doses of a stressor bring about a positive response in the organism undergoing treatment. Evidence is provided here that hormetic UV-C treatments of tomato seed can control disease caused by Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL) and f. sp. radicis-lycopersici (FORL) on tomato (Solanum lycopersicum). Treating seeds with a 4 kJ m⁻² dose of UV-C significantly reduced both the disease incidence and progression of B. cinerea, with approximately 10% reductions in both on cv. Shirley. Disease severity assays for FOL and FORL on cv. Moneymaker showed dose-dependent responses: UV-C treatments of 4 and 6 kJ m⁻² significantly reduced the disease severity scores of FOL, whilst only the 6 kJ m⁻² showed significant reductions for FORL. To determine the effects of treatment on germination and seedling growth, UV-C doses of 4, 8 and 12 kJ m⁻² were performed on cv. Shirley. No negative impacts on germination or seedling growth were observed for any of the treatments. However, the 8 kJ m⁻² treatment showed significant biostimulation, with increases in seedling, root and hypocotyl dry weight of 11.4%, 23.1% and 12.0%, respectively, when compared to the control. Furthermore, significant increases in the root-mass fraction (10.6%) and root:shoot ratio (13.1%) along with a decrease in shoot-mass fraction (2.0%) indicates that the 8 kJ m⁻² treatment stimulated root growth to the greatest extent. There was no effect on hypocotyl and primary root length or the number of lateral roots, indicating no adverse effects to basic root architecture or seedling growth.     

利用酵母双杂交系统筛选与草莓镶脉病毒移动蛋白P1互作的寄主因子

 构建感染草莓镶脉病毒(SVBV)森林草莓的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交系统,筛选出与SVBV P1蛋白互作的15种寄主因子。生物信息学分析发现,这15种寄主因子参与茉莉酸途径、泛素化、光合作用、抗病抗逆、蛋白修饰、蛋白运输和氧化还原等多种生物过程。另外,这些寄主因子还具有其他分子功能,包括氧化还原酶活性、蛋白二硫化物异构酶活性和金属离子结合活性等。本研究初步探讨了P1与寄主因子的互作机理,为揭示SVBV侵染森林草莓以及SVBV在寄主中扩展的分子机制提供理论依据。